本发明提供了一种加氢响应辅酶NAD(P)H荧光探针、制备方法、荧光传感器及应用，属于荧光探针技术领域。本发明制备的加氢响应辅酶NAD(P)H荧光探针在NAD(P)H存在时，其分子中的三甲基苯醌官能团能够被有机金属铱或有机金属铑催化剂催化还原为响应的三甲基氢醌，生成的三甲基氢醌会迅速发生分子内环化从探针分子中脱落，使探针分子荧光打开，实现对NAD(P)H快速高效荧光响应。本发明的加氢响应辅酶NAD(P)H荧光探针结构稳定、荧光量子产率高、pH适应范围广，生物相容性好、具有线粒体靶向性，当其与高活性的有机铱、铑催化剂相结合后，能够快速、灵敏且特异性的检测辅酶NAD(P)H，检测限为1.0μM。