本发明公开了微球制备过程中水相二氯甲烷含量的在线测量方法，属于药物分析技术领域。该方法包括以下步骤：设计多批微球制备实验，开始制备微球并在线采集原始拉曼光谱，通过顶空气相色谱法分析固化过程中水相中二氯甲烷含量，将原始拉曼光谱与固化过程中水相中二氯甲烷含量进行逐一配对并对数据进行异常值去除、样品集划分，对拉曼光谱进行预处理选出最佳光谱预处理方法，优化光谱区间，在最佳条件下采用偏最小二乘法建立微球制备过程中水相二氯甲烷含量在线定量分析模型。本发明的有益之处在于：实现了微球制备过程中水相DCM含量的准确在线测量和质量控制，有效提高了检测效率，避免了制样对测量准确性的影响。